细胞在正常的生长勾当中会不停的代谢，需要有各种卵白酶的介入，当低于-70℃时卵白酶就会住手事情。以是在超低温的情况下，可使细胞住手代谢勾当，进入休眠状况，以便于持久贮存。试验质料根蒂根基质料：● 根蒂根基造就基● 血清● 超净事情台● 无菌二甲基亚砜● 无菌PBS磷酸盐缓冲液● 移液枪● 电动移液枪 耐思相干耗材：● PET/PETG方形试剂瓶● 15mL、50mL无菌离心管 ● 盒装无菌吸头 ● 血清移液管 ● 杯式滤器(0.22 m PES膜) ● 针式滤器 (0.22 m PES膜) ● 冻存管 ● 主动旋盖机● 步伐降温盒试验预备● 冻存液预备：一般的细胞：55%根蒂根基造就基+40%牛血清+5%DMSO主要的细胞：90%牛血清+10%DMSO冻存液配置完成后，15ml离心管分装，4℃前提下贮存备用。若配置量较年夜，可分装入50ml离心管，-20℃前提下冷冻贮存。使用前37℃水浴加热。 ● 待冻存细胞预备：使细胞冻存前，选择细胞生长状况精良，且处于对于数生持久的细胞，冻存前12~24h换新鲜造就基维持细胞状况。 试验流程一、不雅察待冻存细胞密度，约为80%~90%。用移液枪吸出陈旧造就基，插手无菌PBS洗濯细胞1-2次，去除了造就情况中的残留造就基。二、插手适当对于应胰酶或者消化液，使胰酶没细致胞，放入造就箱消化。显微镜下不雅察细胞状况，胞质回缩，细胞间再也不毗连成片，此时插手完终止液终止消化。三、用吸头轻轻奏乐细胞，形成细胞悬液，将细胞悬液1000rpm，离心3-5min。抛弃上清，插手适当预先配制好的冻存液，轻轻奏乐使细胞匀称并计数。用冻存液调治的细胞密度，使之终密度为5 106/ml～1 107/ml。四、用移液枪根据估计容量，分装入细胞冻存管中，接纳主动旋盖机旋盖密封。五、尺度的冻存步伐为降温速度况处-1℃～-2℃/ min，可将待冻存细胞根据如下步调慢慢冻存：室温 4℃ -20℃ -80℃ 液氮持久生存。也可将待冻存放入步伐降温盒，直接-80℃过夜，再转移至液氮生存。接洽咱们TEL：0510-6800 6788E-mail：info@nest-wuxi.com网址：www.cell-nest.com 存眷咱们，获取更多信息！