项目文章J Hazard Mater| 烟台海岸带所哄骗卵白组+磷酸化润色组学展现TDCIPP于牡蛎中的毒理学效应 磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯 (TDCIPP)是一种典型的有机磷污染物，于水情况中广泛存于。先前研究注解，TDCIPP经由过程卵白磷酸化来阐扬多重毒性，可是此中机理尚不明确。2022年7月15日，国际顶刊Journal of Hazardous Materials于线揭晓了中科院烟台海岸带研究所吉成龙等教员的立异研究结果“Toxicological effects of tris(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate in oyster Crassostrea gigas using proteomic and phosphoproteomic analyses”。该研究接纳卵白质组学以及磷酸化润色组学，联合传统要领对于差别浓度TDCIPP处置惩罚的牡蛎举行毒理效应研究。组学阐发显示，TDCIPP经由过程直接磷酸化要害卵白或者上游旌旗灯号通路来调治转录、能量代谢、细胞凋亡以及增殖，让咱们对于TDCIPP的毒理机制有了新的熟悉。中科新生命提供了卵白质组以及磷酸化润色组检测办事。 研究质料牡蛎技能线路步调1：TDCIPP生物浓度；步调2：消化腺构造学变化；步调3：要害酶活性检测；步调4：卵白质组学阐发；步调5：磷酸化润色组学阐发。研究成果1. TDCIPP生物浓度与比照组比拟，5以及50 μg/L TDCIPP处置惩罚组牡蛎中TDCIPP含量显著堆集 (图1)。图1 差别处置惩罚组牡蛎的TDCIPP堆集 2. 消化腺构造学变化H E染色显示比照组消化管腔呈十字形，消化细胞高，管腔窄，消化管上皮厚。TDCIPP处置惩罚组的上皮细胞较薄，管腔较宽，消化管管腔由十字形变为圆形，最高浓度(50 μg/L)处置惩罚组的消化细胞发生脱落。图2 牡蛎消化腺的白腊切片跟着TDCIPP剂量的增长，消化管MLR/MET比值增长，此中50 μg/L TDCIPP处置惩罚组的牡蛎样品MLR/MET值最高；5 μg/L TDCIPP处置惩罚组次之(图3)。 图3 差别处置惩罚组消化腺MLR/MET值 3. 要害酶活性检测CAT以及GST活性于比照组以及TDCIPP袒露组间无显著差异。AChE的活性呈底部变化。于caspase-9活性方面，只有50 μg/L TDCIPP处置惩罚组显著高在比照组。与比照组比拟，TDCIPP医治组caspase-3活性无显著变化。 图4 TDCIPP袒露后消化腺的酶活性 4. 卵白质组学阐发从牡蛎消化腺样本中共鉴定出6705个卵白质。与比照组比拟，50 μg/L TDCIPP处置惩罚组的牡蛎共有551个差异表达的卵白质，此中上调卵白259个，下调卵白292个。GO富集阐发发明，年夜大都DEPs位在细胞内(74)，介入代谢历程(147)以及细胞历程(114)，份子功效重要集中于催化活性(168)以及联合活性(131)。KEGG通路阐发显示，上调的解释卵白于脂类以及氨基酸的代谢历程中富集，下调的解释卵白于三个Hippo旌旗灯号通路等中富集。此中，谷胱甘肽代谢通路笼罩至多DEPs(8)；最显著富集通路是维生素B6代谢；其他富集的KEGG通路与代谢历程有关。 图5 50μg/L TDCIPP处置惩罚的消化腺中DEPs的GO富集柱状图(A)以及KEGG通路富集气泡图(B) 5. 磷酸化润色组学阐发于牡蛎消化腺中，共鉴定出850个磷酸化卵白，152个卵白被差异磷酸化。GO阐发显示，于生物历程中，富集水平最高的是含卵白复合体以及细胞含卵白复合体。年夜大都DPPs的份子功效是核酸联合(21)。细胞身分年夜多位在卵白质-DNA复合体(3)、DNA包装复合体(3)以及核小体(3)中。KEGG通路阐发显示，于MAPK旌旗灯号通路、病灶黏赞同TCA轮回中，磷酸化卵白高度富集。于50 μg/L TDCIPP处置惩罚组中，病灶粘连通路笼罩的DPPs至多(5)。最显著富集通路的是丙酮酸代谢。其他的富集通路介入旌旗灯号转导通路以及能量代谢通路。将鉴定的DEPs与DPPs举行比力，发明于二者间并未呈现堆叠卵白，但KEGG阐发注解，于TDCIPP处置惩罚后，DEPs以及DPPs都介入了旌旗灯号通路。图6 50 μg/L TDCIPP处置惩罚的消化腺中DPPs的GO富集柱状图(A)以及KEGG通路富集气泡图(B) 小编小结本研究哄骗卵白质组学+磷酸化润色组学，联合生化数据以及构造学成果，发明TDCIPP具备刺激性神经毒素，会粉碎细胞凋亡与细胞增殖之间的内部稳态。高浓度的TDCIPP可经由过程直接磷酸化要害卵白或者其上游旌旗灯号通路致使转录、能量代谢、细胞凋亡以及增殖等历程发生异样。