细胞活性(Cell Viability)是细胞生物学试验的一项主要检测指标, 是细胞造就、细胞毒性及心理研究的根蒂根基。Cayman提供多种细胞活性检测相干试剂盒, 可用在评估细胞增殖、细胞活性、代谢活性、细胞周期、细胞毒性以及凋亡等。 细胞增殖检测, 确定活跃破裂细胞的数目, 最直接简朴的要领就是细胞计数。细胞活性(Cell Viability)被界说为样品中康健活细胞的数目占总细胞的百分比, 确定样本中活细胞及逝世细胞的数目。同时, 检测DNA含量或者代谢活性也可提供更多相干信息。 质膜完备性(Plasma Membrane Integrity) 评估细胞膜完备性是检测细胞活性以及评估细胞毒性最经常使用以及最直接的要领之一。具备细胞毒性效应的化合物凡是会粉碎细胞膜的完备性, 引诱细胞坏逝世。如碘化丙啶(Propidium iodide, PI)染料凡是会被康健的细胞解除于外, 然而当细胞膜有破损时, PI则可自由跨细致胞膜而对于细胞核染色。用PI染料可同时区别康健细胞以及逝世细胞。一样, Cayman提供的7-AAD细胞活气检测试剂盒, 7-AAD不克不及进入活细胞但可透过逝世细胞或者受损细胞膜, 而标志胞内DNA。 或者者, 细胞膜完备性也可经由过程监测胞内物资开释到胞外基质来评估。一个最经常使用的检测指标就是乳酸脱氢酶LDH份子, 其为一种可溶性的胞浆酶。当胞膜毁伤时, LDH可快速开释到细胞造就液中。Cayman提供的LDH细胞毒性检测试剂盒便可用在检测细胞坏逝世膜受损时, LDH的开释。 康健完备的细胞可颠末固定、去垢剂破膜处置惩罚, 经由过程上述近似的标志要领来研究细胞周期进程。Cayman提供的细胞周期时相鉴定试剂盒哄骗碘化丙啶(PI), 来标志细胞周期差别时相的DNA。因为PI可直接嵌入DNA链的碱基对于, 是以其荧光强度与细胞中DNA含量成正比。按照染色体的漫衍, 能靠得住显示G0/G1 Vs S Vs G2/M期。此外, CFSE细胞破裂检测试剂盒接纳一种荧光染料, 可散布经由过程活细胞的质膜。CFSE于细胞破裂增殖历程中, 其荧光强度会跟着细胞的破裂而逐级递减, 标志荧光可平均分配至两个子代细胞中 , 是以其荧光强度是亲代细胞的一半 ,按照这一特征 ,CFSE可用在检测细胞增殖 , 细胞周期的估算及细胞破裂等。 7-AAD/CFSE细胞介导的细胞毒性检测试剂盒, 可用在鉴定增殖破裂的细胞, 同时标志受损或者逝世细胞的DNA。末了, Cayman提供的 细胞自噬/细胞毒性双染色试剂盒哄骗自觉荧光探针单丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine MDC)和碘化丙啶(PI)可同时检测吞噬泡以及逝世细胞。 线粒体活性与凋亡(Mitochondrial Activity and Apoptosis) 线粒体最重要的作用是孕育发生ATP, 是细胞能量的重要来历。此外, 线粒体其他的作用还包孕介入细胞旌旗灯号传导、细胞分解、细胞灭亡和细胞周期调控以及细胞生长等。检测线粒体的活性也可显示细胞的康健状况。Cayman近来研发的一系列试剂盒(Mitocheck Activity Assay kits)用在检测电子通报链复合物I, II, III的活性(详情请浏览后续相干章节)。线粒体也可经由过程滋扰电子通报、氧化磷酸化以及ATP天生, 或者经由过程开释能活化caspase家族卵白酶的卵白, 或者转变胞内氧化还原电势等来引诱细胞凋亡 。 JC-1是 一 种 广 泛 用 在 检 测 线 粒 体 膜 电 位 的 理 想 荧 光 探 针 。Cayman提供的JC-1 Mitochondiral Membrane Potential Assy能靠得住检测细胞凋亡初期阶段的线粒体膜电位变化。Caspase-3 Fluorescence Assay经由过程鉴定特异性凋亡标记份子caspase-3的活化, 来检测线粒体诱发的凋亡。 此外, Cayman还提供多种试剂盒用在检测凋亡历程中差别时间点的形态变化。Annexin V-FITC试剂盒用在检测凋亡初期膜的不合错误称性变化。磷脂不合错误称性的漫衍在细胞质膜, 此中磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS) 重要漫衍在质膜内层。于细胞凋亡的初期, 虽然细胞膜仍连结完备性, 但磷脂漫衍的不合错误称性受滋扰, 磷脂酰丝氨酸外翻, 袒露在细胞膜外层。于Ca 2+ 存于时, Annexin V可与带负电荷的磷脂如PS联合。于细胞凋亡的晚期阶段, 可以使用Cayman的Apoptotic Bleds Assay试剂盒举行检测, 该试剂盒哄骗重组的抗体, 与凋亡细胞膜泡上的自身抗原联合。Multi Parameter Apoptosis Assay kit结合使用4种差别的试剂, 同时检测多种凋亡事务。该怪异的试剂盒哄骗FITC-Annexin V联合物作为探针检测质膜不合错误称性, 用TMRE作为探针检测线粒体膜电位, 用7-AAD作为膜通透性/细胞活气唆使剂, 再用Hoechst染料展示细胞核形态。 代谢活性 细胞计数反应绝对于细胞数的几多, 而代谢活性更可能是对于细胞康健状况的评估。将两者联合起来, 即可更周全详细的相识细胞的活性。例如, 于抗肿瘤药物研发中, 其目的可能不需致逝世细胞而仅需敲除了其代谢以及增殖活性, 使细胞维持于预期的静止状况。检测代谢活性的一个经典要领是哄骗四唑盐(Tetrazolium salts), 其于代谢活跃的细胞线粒体中, 被切割形成有色的不溶在水的MTT, 或者水溶性的XTT, WST-1以及WST-8甲臢(formazan), 然后再测定吸光度。孕育发生的甲瓒染料的量与代谢活跃的细胞数目直接相干, 可显示细胞的还原电位。MTT法是细胞增殖检测最通例的要领, 久享盛誉, 具备年夜量的文献撑持。可是，与一些新的四唑盐法比拟, MTT法敏捷度较低。另外一个错误谬误就是因为MTT经还原所孕育发生的甲瓒产品不溶在水, 需有机溶剂DMSO消融后才气于分光光度计上读数, 增长了试验操作步调。而XTT, WST-1以及WST-8则孕育发生水溶性的甲瓒产品, 省去了后续的消融步调。尤为, WST-8与其它四唑盐比拟, 更不变、细胞毒性更低, 合用在较永劫间孵育, 并且WST-8检测敏捷度比其他四唑盐更高。Cayman提供的 Pertecta3D Cell Viability Kit合用在3D细胞造就, 是基在酶催化还原WST-1天生一种甲臢衍生物来举行检测的。与传统的放射性标志的胸腺嘧啶脱氧核苷或者非放射性的 5-溴 -2'-脱氧尿苷 (Brdu)要领比拟 , MTT,XTT, WST-1以及WST-8具备操作简洁的长处。 面临云云浩繁的细胞活性检测试剂盒, 哪一款最合适您的研究呢？ 更多产物及具体信息，请咨询Cayman一级代办署理商-欣博盛生物天下办事热线: 4006-800-892 邮箱: market@neobioscience.com 深圳: 0755-26755892 北京: 010-88594029 上海: 021-34613729 广州：020-87615159 代办署理品牌网站: www.neobioscience.com 自立品牌网站: www.neobioscience.net