单细胞测序作为近几年是炙手可热的技能之一，列位教员于使用这项新技能的时辰，不免会有各类疑难。接下来小编收拾整顿了一些早期常常碰到的问题，分享给列位，但愿可认为筹算开展单细胞试验的教员答疑解惑。Q1：怎样计划我的第一个单细胞试验？于初期计划阶段，您要思量的因素许多，但样本制备是一个主要的出发点。您需要思量的因素之一是处置惩罚的样本类型。是构造、细胞悬液，照旧全血？是否需要解离、富集或者纯化步调？此外，您还要思量每一个试验前提所需的样本数目，和是否需要生物学反复。缩小到单个样本，您该当思量每一个样本需要几多个细胞才气得到所需的成果，这也将为后续的样本富集、纯化以及质控要领提供信息。图1 单细胞试验流程Q2：单细胞测序是否需要生物学反复？因为存于遗传以及情况因素的影响，个别间会存于差异，是以试验设计需要引入生物学反复消弭该差异。最近几年来，单细胞测叙文章对于生物学反复的要求也愈来愈高，例如人的样本，其异质性很高，建议每一组只管即便包管5个样本的生物学反复。而动物模子的样本也只管即便包管每一组3个生物学反复。Q3：每一个样本需要几多个细胞？今朝，对于单细胞悬液需要进步前辈行质检以及计数，一般要求细胞数量≥5万，细胞存活率≥ 80%，将检测及格的细胞经洗涤、重悬制备成适合的细胞浓度 700~1200 cells/ul，以备举行 10x Genomics Chromium X体系上机操作。中科搭载10×Genomics最新的单细胞仪器平台Chromium X有16个通道，每一个通道至多可以捕捉2万个单细胞。凡是每一个样本捕捉6K-1w的细胞数量就能够基本满意试验阐发需求。是否需要更年夜的细胞量，照旧需要按照教员试验目的来决议。图2 Chromium X芯片及细胞捕捉示用意Q4：单细胞测序为什么要选择10×Genomics？于今朝群雄逐鹿的单细胞市场中，为何咱们要选择10×Genomic，缘故原由以下：A：10×Genomics单细胞技能助力科学家揭晓的文章数目遥遥领先。这也反应出泛博科研事情者对于在10X平台的承认度远高在其他单细胞平台和10X单细胞成果的不变性、靠得住性和客不雅性。图3 10×Genomics文章数目B：越发周全的运用，满意科研事情者单细胞多组学的需求。从单细胞转录组结合空间组学，单细胞转录组结合代谢组学和单细胞转录组结合卵白组学等多维度多角度论述表型发生历程中的细胞以及份子调控机制。图4 10×Genomics多组学产物图C：更高的通量，更低的成本。纵不雅单细胞测叙文章，测患上的细胞量愈来愈多，10×推出的Chromium X可实现一次上机拿到上百万个单细胞；而Fixed RNA试剂盒，可以将单细胞样本举行固定，经由过程多批次混样，降低单个样本的成本。Q5：样本类型不合适运输怎么办？中科的单细胞试验团队可认为教员提供上门消化上机办事。不管时间，不管所在，仅需教员与咱们提早预约，并确定教员能提供试验所需仪器后，便可上门完成样本的消化以及上机试验。图6 客户自备仪器以及试剂清单Q6：细胞类型怎样举行解释？凡是咱们细胞类型解释有两种思绪，一种是哄骗软件主动解释，如SingleR 等，但一般主动解释的成果只能作为参考；二是基在文献或者者数据库举行人工解释，专业的人工解释凡是被以为是细胞解释的金尺度，但其历程是极其耗时缓和慢的，并多是主不雅的。中科可以提供以上两种差别的解释要领给教员来选择！图7 互助客户细胞解释图